一种能快速灭活 H7N9 禽流感病毒的手消毒凝胶
    众所周知,普通流感病毒和人感染高致病性禽流感病毒主要通过呼吸道传播,但飞沫传播和手接触传播亦不容忽视。通过口鼻隔离防护和手卫生消毒措施是预防禽流感病毒感染的有效方式。自2004年高致病性禽流感暴发流行疫情出现以来,禽流感疫情现场和预防性消毒备受关注,很多学者先后对H5N1、H3N2、H7N3、H7N9、H9N2等禽流感病毒以及甲型 H1N1流感病毒消毒效果进行研究,但多数研究都是针对现场消毒用各种高效消毒剂,而对皮肤和手消毒剂杀灭禽流感病毒效果的研究鲜见报道。有学者曾对部分皮肤消毒剂杀灭病毒的效果进行观察,结果证明消毒效果都不甚理想。
    洗得宝手消毒凝胶(Ⅱ型)是一种以三氯羟基二苯醚为主要杀菌成分,选择化妆品级凝胶基质及其他辅助成分制成的免水洗型快速手消毒剂,由北京洗得宝消毒制品有限公司研制。该快速手消毒凝胶已经获得国家注册,通过了国家级消毒检测评价机构实验证明具有快速杀灭细菌的效果,且无色无味、水溶性和手感极好。
    为适应日益严峻的人感染高致病性禽流感暴发流行的形势,解决人感染禽流感接触性预防手消毒问题,北京洗得宝消毒制品有限公司诚请浙江省疾病预防控制中心对该手消毒凝胶进行了H7N9禽流感病毒的消毒效果评价。
    实验评价采用的病毒株为人感染禽源H7N9流感病毒株(A/ZJ/16/2013(H7N9),由浙江省疾病预防控制中心微生物所病毒科提供。病毒培养用鸡胚法,9日龄SPF鸡胚由上海大龙实业有限公司提供。实验用中和剂为含3,000mg/L卵磷脂和30g/L吐温80的生理盐水,用前经中和效果鉴定有效后使用。
    中和剂鉴定设计3组实验:(1)消毒剂对鸡胚毒性测定;(2)中和剂对鸡胚毒性测定;(3)中和产物对鸡胚毒性测定。结果证明,用滴度为100EID50 /0.1ml H7N9病毒悬液作为试验病毒指标,该手消毒凝胶的鸡胚无毒性浓度为10倍稀释液;中和剂的鸡胚无毒性浓度为10倍稀释中和剂;各稀释度中和产物对鸡胚生长无影响。因此,所鉴定的中和剂可有效中和该手消毒凝胶对鸡胚的残留毒性,中和剂有效。
    H7N9禽流感病毒消毒效果测定:采用鸡胚培养法进行,通过在消毒剂与甲型H7N9病毒株间建立剂量效应关系,鉴定手消毒凝胶杀灭H7N9禽流感病毒的能力。
   (1)试验病毒悬液制备与滴度(EID50)测定是取甲型H7N9禽流感病毒用生理盐水进行10倍稀释,接种鸡胚,35℃培养后收集鸡胚尿囊液,经高速离心取上清液即得到病毒悬液。(2)病毒滴度测定是取病毒悬液及其稀释液接种鸡胚,经35℃培养48h,每天观察鸡胚生长情况。24h内死亡的鸡胚为非特异死亡弃去,鸡胚培养48h后收获尿囊液用0.75%豚鼠血进行病毒血凝(HA)试验,根据ReedMuench方法计算鸡胚半数感染剂量(EID50)。(3)病毒灭活效果测定是将受试消毒剂用生理盐水从最大无毒浓度开始,选择3个稀释度进行双倍浓度稀释,每个稀释度与等量的100EID50病毒混匀,室温作用不同时间后接种鸡胚,经35℃培养48h,每天观察鸡胚生长情况,收获尿囊液测HA滴度,计算消毒剂灭活H7N9禽流感病毒的效果。阳性对照为甲型H7N9禽流感病毒株接种鸡胚;阴性对照为灭菌生理盐水接种鸡胚。
    消毒效果评价结果:根据鸡胚的存活及尿囊液血凝试验判断消毒剂对病毒的灭活作用,该手消毒凝胶原液、10倍、100倍稀释液作用2、34min,均可有效灭活甲型H7N9禽流感病毒。因此得出结论,洗得宝手消毒凝胶(Ⅱ型)只需要作用3min以内即可完全杀灭H7N9禽流感病毒,具有良好的消毒效果,可用于预防禽流感快速手消毒。

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